Hagyományos oszlopkromatográfia

Az előkészítő munkát jól kell elvégezni:
Az oszlop kiválasztásakor vegye figyelembe, hogy van -e csiszolólap. A csiszolódeszkák nélküli oszlopok esetében ne felejtsen el kitölteni az alját néhány pamutral. A pamutnak nem szabad túl vastagnak vagy túl vékonynak lennie, mindaddig, amíg megakadályozhatja a szilikon kijönését. (A blogger közvetlenül lebontotta a ruhadarabot, és felhasználta a pamut behelyezésére a dugó kimenetébe)
Készítse el a minimális polaritási eluent, az UV lámpát (a laboratóriumi személyzet számára ajánlott, kézi, készen áll a fénykép készítésére), a nyomóeszközöket és a kémcső -állványt, ha szükséges!

Válasszon egy megfelelő oszlopot, adjon hozzá szilikon gélt, áztassa a szilikon gélt és simítsa le
A kiválasztásahagyományos oszlopkromatográfianagyon fontos, és méretüket a termékmennyiség alapján kell kiszámítani, amely általában felosztható:

A laboratóriumban az oszlop átmérőjének és a magasságának leggyakoribb aránya általában 1: 2,5 és 1:15 között van. A minta terhelése során álló fázisként alkalmazott szilikagél mennyisége körülbelül 20-40 -szerese a mintának. Az oszlopok kiválasztásának standardjának a minta TLC lemezmászási helyzetén kell alapulnia. Ha a közvetlen közelében sok szennyeződés van, próbáljon meg egy nagyobb oszlopot a lehető legnagyobb mértékben választani, hogy a mintát egy kis vékony réteggel lehessen lefedni (az ajánlott vastagság 5 mm alatt). Ha a szennyeződések messze vannak, akkor ez a vastagság természetesen megnövelhető, de nem javasolt, hogy a minta vastagsága meghaladja a 2 cm -t, kivéve, ha a terméket egyszerűen csak mossák.

Sokan hibát követnek el, amikor azt gondolják, hogy több szilikon hozzáadása, még ha vastagabb is a mintámon, el lehet választani jól? Ez a válasz negatív!
Ennek oka az, hogy ezek az emberek soha nem gondolták, hogy az alábbi és a fenti minták nem ugyanazon a vonalon futnak, tehát csak néhány tisztaságot szerezhetnek, amelyek többségét keresztezték, nem is beszélve a szennyeződésekről, az idő pazarlásáról és az oldószerekről!

Ez az oka annak is, hogy a minta vékonyodást igényel!

Az oszlop kiválasztása után a szilikon hozzáadása egy táplálékcsatornán keresztül megtehető. Ugyanakkor ügyeljen arra, hogy maszkot viseljen, és működjön egy füstfutóban. Ennek okát a Blogger (szilikózis) nem fejleszti ki.
Ami a szilikagél beszivárgását illeti, az ajánlott eljárás a következő: Először helyezze a szilikagél oszlopot a szilikagél vertikálisan felszerelt szilikagéltel, a szilikagél felületét a kezével, majd a szilikagél oszlop alját csatlakoztassa a vízszivattyúhoz, szivattyúzza ki a szilikagélet, majd öntsön a legkevésbé poláris eluentbe. Amikor az eluens kiszivárog, zárja be a kizáró szelepet, hogy megakadályozza az oldószer szivattyúzását a vízszivattyúba.
Ezután nyomás alatt a szilikon gél egyenletesen átitatható, ha hét vagy nyolc oszlopmennyiséget öblítünk a legkisebb mennyiségű fejlődő szerrel.

Minta

Adjunk hozzá vízmentes nátrium -szulfátot vagy kvarc homokot
Annak elkerülése érdekében, hogy az eluens hozzáadása során befolyásolja a minta rétegét, egyenetlenséget, deformációt és az elválasztási hatékonyság befolyásolását, a vízmentes nátrium -szulfát vagy a kvarc homok rétegét általában a minta rétegére fektetik.
Mérnökeink személyesen inkább a vízmentes nátrium -szulfátot fektetnek, mivel szárítási funkcióval is rendelkezik, és barátságos az oldószerekkel, például a diklór -metánra, amelyek hajlamosak az illékonyodásra, a hőelnyelésre és a kondenzációra!

Gradiens elúció, mintavétel és gyűjtés
A betöltés után először öblítse le az oszlopot egy kis poláris oldószerrel (egy olyan oldószer, amely nem engedi a terméket áthaladni) a 2-3 oszlopmennyiségekhez (az egyik oszlopmennyiség a be- és kiáramló mobilfázis térfogata) az egységesség biztosítása érdekében, majd válassza ki az elúciónak az arányát.

Hogyan válasszuk ki azt az eluentet, amely áthalad az oszlopon?
Az Eluent aránya az az arány, amikor a termék eléri a kb.
Ez az oszlopmosás tapasztalata, amelyet sok könyvet olvastam és megosztottam, és a tényleges folyamat is nagyon hasonló. Személy szerint inkább kétszer csökkentem a gradienst.
Például, ha a TLC lemezmászás oldószere PE/EA =2: 1, akkor a blogger nagyobb valószínűséggel indítja el a gradiens elúciót a PE/EA -ból =4: 1, és vége a PE/EA =2: 1 -nél, általában jobb eredményekhez vezetve.

Vannak technikák is az eluens gyűjtésekor. Először is kiválaszthat egy nagyobb kémcsövet, hogy megkapja, és amikor a TLC közeledik a célponthoz, váltson egy kisebb kémcsőre. Ez csökkentheti a több fogadás lehetőségét és elkerülheti a szennyeződéseket.

Ha olyan helyzetekkel találkozik, amelyekben a szennyezősági pontok és a termékpontok közel állnak egymáshoz, különösen a gyenge fluoreszcenciával rendelkező személyekhez, ne felejtse el, hogy ne gyakoroljon nyomást. Ehelyett válassza ki az oszlop átadását normál nyomás alatt, és változtassa meg a csövet minden alkalommal, amikor fel vagy annál kevesebb csövek vannak csatlakoztatva, ami szintén növelheti a tisztítási valószínűséget.

Ne felejtse el, hogy ne kezelje az oszlopot időben!
Sok embernek szokása feltételezni, hogy az oszlopot átadták és szárították, amikor a későbbi szakaszban a TLC után egy vagy két csőben nincs termék.
Csak rájöttem, hogy a hozam túl alacsony, amikor kiszámítottam, vagy amikor spektrumot készítettem, azt tapasztaltam, hogy a spektrum helytelen, és elmulasztotta a rossz pontot. Mélyen megbántam.
Ezért ajánlott, hogy ne rohanjon az oszlop feldolgozására a kívánt pont kitöltése után. Ehelyett végezzen nukleáris mágneses rezonanciát, hogy feldolgozza a hozamot a feldolgozás előtt.
Ha elfoglalt vagy, vagy siet, hogy ezzel megtisztítsa más vegyületekethagyományos oszlopkromatográfia, ajánlott öblíteni egy magas polaritású jóindulatú vegyes oldószert, és az azonosítási eredményekhez külön -külön hagyja el az eluens ezen részét.